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    一、裸鼠成瘤模型

    (1) 实验原理

    肿瘤是危害人类生命健康最严重的疾病之一,在不少国家,肿瘤的死亡率仅次于心血管疾病而占第二位。在我国,肿瘤也是一大类常见病,多发病。怎样预防和控制肿瘤是世界性的医学难题。裸鼠是随着近代医学的发展,特别是肿瘤学和免疫学研究的需要,在近十几年中发展起来的动物模型,由于裸鼠的免疫缺陷,在一定情况下,不排斥来自异种动物的组织移植,因此,可用其建立理想的人类肿瘤可移植实验动物肿瘤模型。人体肿瘤移植于免疫缺陷动物(裸鼠),能保持其生物学特性,用于研究人体肿瘤对药物的敏感性有很大帮助。早期工作是将人体肿瘤移植于动物缺乏免疫机能的特殊部位,如鸡胚、动物的眼前房、仓鼠颊囊内等,虽有一定比例的成活率,但因肿瘤生长缓慢又受移入部位包膜的限制,肿块往往较小,难于传代,更不能适应需要较多瘤源的实验治疗工作。因此,利用裸鼠建立肿瘤模型进行防治研究,是基础医学研究中的重要课题。


    (2) 应用简介

    裸鼠皮下荷瘤是指将人源或鼠源细胞注射到免疫缺陷的Balb/c 裸鼠皮下,通过施加药物或其它条件来验证细胞成瘤或转移能力的实验方法。裸鼠肿瘤模型是研究肿瘤学、免疫学、药品与生物制品的安全性评价以及有效性筛选等研究课题的基础。


    (3) 实验方法

    Step1:准备细胞样品,生理盐水重悬:对接种环境进行消毒,用注射器进行细胞重悬,酒精棉球对裸鼠注射部位消毒后,取对数生长期的细胞,制成浓度为1*107/ml的细胞悬液。

    Step2:细胞计数,注射细胞到裸鼠皮下:按照分组进行接种,每只裸鼠于右腋皮下缓慢接种150μl细胞悬液,拔针后迅速用针头将细胞聚集,防止细胞液外漏。

    Step3:观察记录成瘤情况

    Step4:处死裸鼠,取出肿瘤,做进一步研究


    (4) 案例展示

     


    (5) 常见问题

    ①细胞状态对成瘤影响很大,在计划做荷瘤实验时务必确保细胞处于一个较好的状态,一般注射细胞数目不少于1*106个。

    ②虽然裸鼠具有一定的免疫缺陷,但并不等于完全没有排异反应,一般选择年龄不超过7周龄的裸鼠进行实验,年龄太大可能会影响成瘤效果。

    ③注射位点的选择也有一定技巧性,一般选择裸鼠腋下位置注射是因为这个位置血流丰富,易于短时间成瘤。

    ④建议在进行正式实验之前,先开展预实验,确定细胞的成瘤性。


    二、慢性抑郁型/EAE动物模型

    (1) 实验原理

    抑郁是一种以情绪低落,思维迟纯行为迟缓为主要症状的精神疾病,同时可伴有睡瞬减少,体重降体症状。

    模型制作:

    慢性温和的不可预知性应激(chronicmildstress,CMS)甶Katz等于1981年创立,但缺点较多,如过强的应激刺激常导致动物死亡。由Willner等对其进行改进,是目前应用和研究较多的一种抑郁症模型。让大鼠在2〜4周内每天经历一种不愉快的轻度应激,包括冷水游泳(4°C , 5min),电击(电流强度1.0mA,频率1次/分),热环境(45°C,5min),日夜颠倒,闪光刺激(3次/分),禁食,禁水,夹尾(1min)等刺激。每种刺激形式不连续2天出现,形成一种CMS,避免动物对同一种刺激产生适应。


    (2) 应用简介

    抑郁模型可用于抗抑郁药物的筛选及抑郁病理生理机制的研究,因其采用的刺激因子类似人在生活中经历的应激事件强度,较好地模拟了人类快感缺乏、兴趣降低这一核心症状,并且模型稳定持久,作为抑郁应激模型是理想的。


    (3) 实验方法

    适应性喂养

    实验小鼠保持自由饮水、进食,温度23~25℃,动物房12g-12h昼夜交替,适应性喂养一周后进入实验。

    EAE造模

    实验鼠称重,腹腔注射3.5%水合氯醛麻醉(0.5ml/100g),背部备皮,酒精棉球消毒后各小鼠分别于背部中线两侧皮下4点注射抗原乳剂(MOG35-55)0.2ml。免疫当天(第0d)及48h(第2d)分别给模型各组小鼠腹腔注射PTX每只500ng(0.2ml)。诱导小鼠产生EAE。


    (4) 案例展示

     


    (5) 常见问题

    目前尚无公认的经典测量抑郁情绪的测验,在各种抑郁模型动物中主要通过以下试验测抑郁水平:多用敞箱试验进行行为测评,表现为大鼠自发性探究行为明显减弱,运动能力降低。体重减轻、性行为减少、血浆中糖皮质激素升高,睡眠周期萦乱。同时发现老鼠天生偏好糖水的兴趣下降,运用糖水消耗试验测定24h饮用1%蔗糖溶液的量,若糖水消耗显菩降低,表示抑郁模型造模成功。


    三、大鼠心肌梗死/脊髓损伤模型

    (1) 实验原理

    SD大鼠心肌梗死模型

    通过结扎左冠状动脉前降支(LAD)制作心肌梗死模型。

    大鼠脊髓损伤实验动物模型

    脊髓损伤模型种类繁多,各有其优缺点,在应用时应根据具体实验研究目的和条件作出科学的选择。目前,国内脊髓损伤实验研究最常选用的动物是大白鼠、兔、猫、犬。体型较大的动物在实际的实验操作中存在如下不利因素:手术操作步骤相对复杂,切口容易感染,容易死于术后的脊髓损伤并发症,一定程度影响了实验结果。大鼠作为一种价格便宜、容易饲养的动物,作为制作脊髓损伤模型还有如下特点:再现性好;临床相关性好;与人类高度同源性;重复性强;适应范围广;操作简单;死亡率低等。


    (2) 应用简介

    SD大鼠心肌梗死模型

    实验建立的标准化心肌模型可进一步用于心室重构机制和治疗方面的研究,甚至对各相关领域研究的相互参考和借鉴都能起到重大作用。

    大鼠脊髓损伤实验动物模型

    脊髓损伤的治疗作为临床上的一大难题,建立良好的动物模型对于该项疾病的研究至关重要。脊髓损伤的修复与再生成为研究重点,只有建立标准的、可重复性高的动物模型才能进行治疗方面的进一步研究。


    (3) 实验方法

    SD大鼠心肌梗死模型制备流程

    实验鼠称重,7%水合氯醛按5ml/kg 行腹腔注射麻醉。颈部、胸部备皮,用酒精棉球对手术区消毒,颈部正中切口,钝性分离两侧肌肉暴露气管,于大鼠口腔行气管插管后接小动物呼吸机,保持呼吸稳定后在左胸前第3、4肋间作横切口,依次钝性分离各层肌肉,小心剪开肋间肌,暴露心脏后撕破心包膜,挤出心脏在左心耳的右缘下1-2mm处、肺动脉圆锥左缘处用圆针穿过左冠状动脉前降支下方的心肌表层,用5-0线结扎,结扎成功后,可观察到结扎血管以下心室壁稍变白,立即将心脏放入胸腔并缝合胸腔,用注射器将胸腔内空气抽出,确定无开放性气胸后依次缝合胸壁各层组织。大鼠术后恢复自主呼吸后拔除气管插管。

    大鼠脊髓损伤实验动物模型制备流程    

    实验鼠自购回后动物房12h-12h昼夜交替,保持大鼠自由饮水、进食,温度23-25℃,适应性喂养一周后进入实验。

    Wistar大鼠称重,采用7%水合氯醛5ml/kg腹腔注射麻醉后,俯卧位固定于手术台上,以T10棘突为中心,备皮,酒精消毒后取背部正中切口,长约2cm,依次切开皮肤、皮下组织,切开并分离脊柱两侧肌肉及筋膜,显露T9~T11椎体棘突及椎板。然后用止血钳小心咬除T10及附近棘突与椎板,暴露并保持硬脊膜的完整。用2.2×5mm弧形面与脊髓接触,压迫为质量50g的重物,压迫时间5min,大鼠双后肢瘫痪证明造模成功。逐层缝合肌肉及皮肤。


    (4) 案例展示

    SD大鼠心肌梗死模型

    大鼠脊髓损伤实验动物模型 


    (5) 常见问题

    ①器械:动物呼吸机。开胸制作心梗模型,维持呼吸至关重要。虽然据说某些牛人可以不用呼吸机,但是我想这是经验积累的结果,开始时必然要用;况且需要看此说明的人应该没有牛到这个程度。当然,如果你经费异常充足,不在乎死亡成千上万的大鼠也可以。显微器械,最主要的是针持,大鼠胸腔、心脏均很小,常规器械无法进入胸腔缝扎。其他手术器械以眼科器械为主。

    ②动物:应选择成年健康大鼠,耐受性较好。最重要的是要充分利用每一只动物,包括死亡的大鼠。许多人都知道制作大鼠模型需要多练习,但是练习不是买一大批大鼠,不停地缝扎,然后不停地扔掉死的大鼠;当然,制作心梗模型死亡一些大鼠是很正常的事情。练习的前提是对大鼠解剖及操作过程的熟悉,如果可能的话,最好先找一份大鼠的解剖图谱,熟悉手术区域的解剖结构;同时研究实验流程,熟悉每一个实验步骤。大鼠死亡后,不要急着扔掉,利用它练习每一个你不熟悉的操作步骤,直到熟练为止。

    ③实验者:实验者必须具有一种平和的、耐得住寂寞的心态,制作模型需要时间,尤其是早期,需要耐心、仔细的摸索;必须对每一个步骤进行认真地研究。最熟练的制作者做一只大鼠模型也需要30到40分钟的时间,加上准备及扫尾的时间,制作十只模型就需要一天的时间,如果你废寝忘食多用用功也可能做到15只左右,这样一天下来腰酸背痛是必然的,你能坚持多久?不熟练的话,一只就要两、三个小时;同时还要看着大鼠在你的手中死亡,这是很揪心的事情。因此,实验者必须具备良好的心态,急于求成、难耐寂寞者不适合做此实验。

    本文系气管切开插管,缝扎LAD制作模型。亦有经口插管,液氮冷冻制作模型。



    四、急性胰腺炎/结肠炎大鼠模型

    (1) 实验原理

    急性胰腺炎

    急性胰腺炎(Acute Pancreatitis,AP)是非常普遍的临床病症,属于免疫紊乱引起的疾病,多数患者发病于胆管疾病或者过量酒精摄入。临床病理表现随疾病的严重程度而不同,从轻微、自限性的疾病形式,发展至并发脓毒症、多器官衰减的急性重症胰腺炎(Severe acute pancreatitis,SAP),引起高达30-40%的死亡率。由于目前对其发病机制仍未完全阐明,临床上缺乏特效的手段阻止胰腺组织坏死的发生和发展。

    溃疡性结肠炎

    溃疡性结肠炎(UC)是一种主要累及直肠、结肠黏膜的慢性非特异性炎症,以腹痛、腹泻、粘液血便等为主要临床表现。


    (2) 应用简介

    急性胰腺炎

    在临床研究中建立与人类发病机制最为接近的动物模型,从而认识和探讨发病机理,也为验证治疗手段和治疗药物的可行性提供最重要的数据支持。

    溃疡性结肠炎

    建立一种类似于人类UC的动物模型,对研究UC的发病机制、病变发展规律和临床治疗有着重要的应用价值。


    (3) 实验方法

    急性胰腺炎建模

    实验大鼠自购回后保持其自由饮水、进食,温度23-25℃,动物房12h-12h昼夜交替,适应性喂养一周后进入实验。

    实验大鼠称重,7%水合氯醛(5ml/kg)腹腔注射进行麻醉,仰卧位固定大鼠,正中切口进入腹腔;找到胃十二指肠交界处,再向下找到胆胰管十二指肠开口处;1ml注射器穿刺进入十二指肠粘膜内的胆胰管开口并深入1cm;用两枚动脉夹临时夹住胆胰管肝门部和穿刺针,以防注射脱氧胆酸钠时液体流入肝脏和十二指肠;向胆胰管内匀速注射1.5%脱氧胆酸钠(用药剂量1.0ml/kg,注射速度0.2ml/min);注射完毕后继续阻断胆胰管上下端5min,移去夹在胆胰管上下端的动脉夹;补充腹水,两层关腹。

    溃疡性结肠炎大鼠模型构建

    大鼠自购回后保持其自由饮水、进食,温度23-25℃,动物房12h-12h昼夜交替,适应性喂养一周后进入实验。

    模型鼠以200g/L蜂蜜水自由饮用,隔日按大鼠体重灌服猪油(灌胃剂量15g/kg,灌胃前先加热融化),并与油脂隔日灌服白酒(灌胃剂量20ml/kg),共灌服20d。第6天和第20天于大鼠的左、右侧足跖、腹股沟及背部五点注射抗原乳化液1ml(含抗原8mg).各组大鼠于第21天禁食36h,用7%水合氯醛(5mL/kg)麻醉,用硅胶管由肛门轻缓插入8-10cm,正常对照组用生理盐水2.5ml灌肠,模型组用灌肠液按照2.5ml/只的剂量灌肠(灌肠完毕后提起大鼠尾部,倒置1min)。


    (4) 案例展示

     

    急性胰腺炎

     

    溃疡性结肠炎大鼠


    (5) 常见问题

    ①动物未出现预期效果或死亡率较高:需要控制好药物剂量

    ②一般实验室构建的为急性胰腺炎模型,不适宜做长期给药实验;



    五、大鼠颅脑损伤/MCAO模型

    (1) 实验原理

    大鼠MCAO模型

    MCAO即大脑中动脉闭塞,该模型阻断颈外动脉及其分支,且阻断翼腭动脉,以切断颅外来源的侧副循环血流。从颈外动脉插入栓线,经颈内动脉到大脑前动脉,机械性阻断大脑中动脉发出处的血供来建立大脑中动脉缺血模型。

    大鼠颅脑损伤

    创伤性脑损伤(traumatic brain injury, TBI)是全球范围内主要的致死致残因素之一,通过一系列神经化学分子和信号的改变引起神经功能的紊乱,从而导致患者在行为、认知和记忆方面的损害。


    (2) 应用简介

    大鼠MCAO模型

    脑卒中又称“中风”、“脑血管意外”,是一种急性脑血管疾病,包括缺血性和出血性卒中,其中缺血性脑血管病占60-70%。

    卒中又名大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO),是一种局灶性脑缺血模型,目前应用最广泛的脑缺血模型。其发病机理与人类缺血性脑卒中表现相似,对于制作模拟人脑缺血模型对脑缺血发病机制及药物筛选有重要意义。

    大鼠颅脑损伤

    尽管对于 TBI 的研究投入了大量的人力财力,但由于其复杂的病理生理学机制,至今没有有效的治疗方案,如何提高这部分病人的生存率对我们的临床工作有重要意义。


    (3) 实验方法

    动物适应性喂养

    动物自购回后保持动物房12h-12h昼夜交替,保持动物自由饮水、进食,温度23-25℃,适应性喂养一周后进入实验。

    大鼠MCAO模型构建

    参照改良Zea Longa线栓法构建大鼠MCAO模型。大鼠术前12h禁食不禁水。

    大鼠称重,7%水合氯醛(0.5ml/100g)腹腔注射麻醉,颈前部备皮、消毒,行颈正中切口,钝性分离右侧皮下组织及肌肉暴露出颈总动脉,眼科镊小心分离伴行于颈总动脉的迷走神经及动脉周围粘膜组织,分离出颈总动脉大约1~1.5cm.继续向头部分离,小心剔除覆盖于动脉上方的粘膜组织,可见颈外动脉、颈内动脉与颈总动脉呈“Y字形”分布,游离出独立的颈内、外动脉。结扎颈外动脉及颈总动脉近心端,颈内动脉埋线并用动脉夹暂时夹闭。在颈总动脉近心端结扎处剪一“V”形切口,用眼科镊夹持栓线由颈总动脉进入颈内动脉,到达动脉夹时,将埋线稍微拉紧(防止渗血),松开动脉夹,继续插入栓线,当特制栓线黑色标记处到达Y字形分叉口附近时,此时栓线已进入大脑中动脉且不能继续前行。

    检测

    栓线插入完毕后,将预留的结扎线拉紧固定。医用棉签清理颈部血块,缝合皮肤,酒精棉球消毒,将大鼠放回笼子。90min过后,麻醉大鼠,颈部消毒,打开一个小口,用眼科镊夹住栓线固定处将栓线拔出约1cm实现血流再灌注,剪去多余栓线,逐层缝合。

    SD大鼠颅脑损伤模型(Feeney 自由落体法)

    实验鼠称重,7%水合氯醛麻醉(5ml/kg),头部备皮,俯卧固定于颅脑损伤仪上。手术区酒精棉球消毒,将大鼠头顶部皮肤失状切开,剥离筋膜。以人字缝前3mm、冠状缝右侧3mm为圆心用颅骨钻钻孔并扩大骨窗(直径5mm),钻孔过程需注意不能损坏硬脑膜,将致伤撞垫轻轻置于骨窗中央的硬脑膜上,用40g的砝码自20cm高处沿滑杆自由落体落下打击撞垫(冲击力为800g·cm),造成大鼠右顶叶局限性脑挫裂伤。骨蜡封窗,缝合头皮。


    (4) 案例展示

     

    大鼠MCAO模型

     

    SD大鼠颅脑损伤模型


    (5) 常见问题

    1)分离颈部肌肉时,两侧小块肌肉叫鼓泡腺体(很多人误认为是甲状腺),避免损伤导致出血。

    2)见到颈动脉鞘了则要注意细致分离迷走神经,若损伤则可能影响其呼吸而死亡的。

    3)分离血管时,要尽量将血管剥离的干净些,这样在用眼科剪剪口时就不会误剪外膜,且要剪一个斜行的切口。

    4)系牢拴线绕在CCA远心端的细线时注意掌握力度,不可不扎,否则出血较多,但不可过紧,否则插线困难

    5)线栓是分几次一点点插进去的,而不是夹住线栓的中间部分一下子插进去的,直到遇到轻微阻力停止插线。


    六、动脉粥样硬化/肺炎模型

    (1) 实验原理

    动脉粥样硬化模型

    常用的复制方法有下面几种(包括高血脂模型):

    ①高胆固醇、高脂肪饲料喂养法:是目前比较常用的方法,特点是死亡率低,可长期观察,但费时久。一般在家兔、鸽、鸡等,经数周喂养就可产生明显的高脂血症,经数月就能形成早期的动脉粥样硬化病变。大白鼠、小白鼠及犬则较难形成,如果饲料中增加蛋黄、胆酸和猪油等,可用促进作用。为了促进病变的形成,在高脂饲料中还可加入甲基硫氧嘧啶、丙基硫氧嘧啶、甲亢平、维生素D、蔗糖等。

    ②免疫学方法:将大白鼠主动脉匀浆给兔注射,可引起血胆固醇、β-脂蛋白及甘油三脂升高。

    ③注射儿茶酚胺类药物法:可引起主动脉病变,呈现血管壁中层弹性纤维拉长、劈裂或断裂,病变中出现坏死及钙化。

    ④注入同型半胱氨酸法:冠状动脉管腔变窄、动脉壁内膜肌细胞增生、纤维组织增生、弹力纤维断裂、管壁变厚、基质中出现成堆的颗粒状和纤维状异染物质。

    ⑤注射表面活化剂法:其中以甘油三脂升高最强,其次是磷脂、游离脂肪酸及游离胆固醇,对胆固醇脂没有影响。

    ⑥胆固醇一脂肪乳剂静脉注射法:总胆固醇升高至正常的6倍,其中主要是游离胆固醇,游离胆固醇和总胆固醇的比值为90%。以后血浆总胆固醇逐渐降低,6小时时出现一低峰,后略有回升。3~4天后游离胆固醇和总胆固醇的比值接近正常(40%左右),直到7~14天血浆胆固醇恢复正常。

    ⑦幼乳大白鼠法:一般认为这种高胆固醇血症对甲状腺素及其衍生物类药物非常敏感,而对某些胆固醇生物合成抑制剂则不敏感。

    ⑧其它方法:还有许多因素可诱发高脂血症及动脉粥样硬化症。例如使动物脑部缺血、电刺激中枢神经系统、高度应激状态、鸟类应用大剂量雌激素和暴露于CO环境、气囊异管损伤动脉壁内皮细胞等。

    小鼠肺炎模型构建

    细菌性肺炎(bacterialpneumonia)占成人各类病原体肺炎的80%。然而过去30~40年中,由于细菌耐药率的不断增高,大量广谱或超广谱抗菌素投入临床并未使肺炎的死亡率持续下降。有报告住院死亡病人约15%与肺炎有关。社区获得性肺炎(CAP)死亡率为5%~10%,而医院获得性肺炎(HAP)的病死率则高达20%~50%。


    (2) 应用简介

    动脉粥样硬化模型

    动脉粥样硬化(AS)是我国和世界上严重危害人类生命健康的疾病之一,其发病率和死亡率均居各种疾病前列,是严重影响人类健康的心血管疾病.因此建立一种脂质代谢和斑块与人类相似的实验性动脉粥样硬化整体动物模型具有重要意义。

    小鼠肺炎模型构建

    肺炎的临床症状趋于不典型,所谓“重症”肺炎时有发生,尤其在婴幼儿、老年人和免疫抑制患者中病死率极高。提高肺炎的病原学诊断水平,建立肺炎的动物模型,确立肺炎的动物诊断标准和肺炎动物模型的观测指标,是临床处理重症肺炎迫切而急需解决的课题。


    (3) 实验方法

    动脉粥样硬化模型

    常用的复制方法有下面几种(包括高血脂模型):

    胆固醇、高脂肪饲料喂养法:具体复制方法:兔诱发模型:体重2kg左右,每天喂服胆固醇0.3g,4个月后肉眼可见主动脉粥样硬化斑块;若每天剂量增至0.5g,3个月后可出现斑块;若增至每天1g,可缩为2个月。在饲料中加入15%蛋黄粉、0.5%胆固醇和5%猪油,经3周后,将饲料中胆固醇减去,再喂3周,可使主动脉斑块发生率达100%,血清胆固醇可长高至2000mg%。大白鼠诱发模型:喂服1~4%胆固醇、10%猪油、0.2%甲基硫氧嘧啶、86~89%基础饲料,7~10天;或喂服10%蛋白黄粉、5%猪油、0.5%胆盐、85%基础饲料,7天后均可形成高胆固醇血症。小白鼠诱发模型:雄性小白鼠饲以1%胆固醇及10%猪油的高脂饲料,7天后血清胆固醇即升为343±15mg;若在饲料中再加入0.3%的胆酸,连饲7天,血清胆固醇可高达530±36mg%。鸡、鸽诱发模型:4~8周的莱克享鸡,在饲料中加入1~2%胆固醇或15%的蛋黄粉,再加5~10%的猪油,经过6~10周,血胆固醇升至1000~4000mg%,胸主动脉斑块发生率达100%。鸽喂饲胆固醇3g/kg/天,加甲基硫氧嘧啶0.1g,可以产生较多动物斑块。

    ②免疫学方法:将大白鼠主动脉匀浆给兔注射,可引起血胆固醇、β-脂蛋白及甘油三脂升高。给兔注射马血清10ml/kg/次,共4次,每次间隔17天,动脉内膜损伤率为88%,冠状动脉亦有粥样硬化的病变;同时给予高胆固醇饲料,病变更加明显。兔喂饲含1%胆固醇的饮料,静脉注射牛血清白蛋白250mg/kg,可加速高胆固醇饲料引起的动脉内膜病变形成。

    ③注射儿茶酚胺类药物法:给兔静脉滴注Norepinephrine1mg/日,时间为30分钟。一种方法是先点滴15分钟,休息5分钟后再滴15分钟;另一方法是每次点滴5分钟和休息5分钟,反复6次。

    ④注入同型半胱氨酸法:给兔皮下注射同型半胱氨酸硫代内脂(dl-homocysteine thiolactone)20~25mg/kg/日(以5%葡萄糖溶液配成1mg/ml的浓度),连续20~25天,成年兔及幼兔均可出现动脉粥样硬化的典型病变。

    ⑤注射表面活化剂法:给大白鼠腹腔注射Triton WR1339 300mg/kg,9小时后使血清胆固醇升高3-4;20小时后雄性大白鼠血清胆固醇仍为正常的3~4倍,而雌性大白鼠却为6倍左右;用药后24小时左右升脂作用达最高点,48小时左右恢复正常。

    ⑥胆固醇一脂肪乳剂静脉注射法:将胆固醇及猪油各3g在电磁加热搅拌下完全溶解后加入吐温-803g,搅匀,再缓缓加入丙二醇5ml和沸水的混合液,充分搅拌乳化,使成100ml,经抽滤后显微镜下检查,乳剂颗粒均匀,并小于7~8μm即可应用。给兔耳缘静脉注射5ml/kg,可见血浆胆固醇及甘油三酯立即升高。

    ⑦幼乳大白鼠法:一般乳幼大白鼠的血清胆固醇高于或成年大白的2~3倍,这是由于乳汁中脂肪含量很高,而甲状腺功能尚不健全的缘故。若用一般饲料取代乳汁喂养,则血清胆固醇很快就能降至正常成年大白鼠的水平。选用出生25天的乳幼大白鼠,雌雄兼用,体重30~50g,在不脱离母鼠乳汁喂养的条件下,进行实验观察药物的降血胆固醇作用,与对照组比较效果。

    ⑧其它方法:还有许多因素可诱发高脂血症及动脉粥样硬化症。例如使动物脑部缺血、电刺激中枢神经系统、高度应激状态、鸟类应用大剂量雌激素和暴露于CO环境、气囊异管损伤动脉壁内皮细胞等。

    小鼠肺炎模型构建

    动物适应性喂养

    动物房12h-12h昼夜交替,保持C57BL/6小鼠自由饮水、进食,温度23-25℃,适应性喂养一周后进入实验。

    C57BL/6小鼠肺炎模型建模

    C57BL/6小鼠7%水合氯醛(0.5ml/100g)腹腔注射麻醉,麻醉成功后仰卧位固定于操作台,颈部备皮、酒精棉球消毒,行颈部正中切口(约1.5cm),分离颈部皮肤、肌肉组织,暴露气管,采用1ml注射器穿刺进针入气管,按1ml/g缓慢滴注LPS(5mg/ml)溶液,注射完成后逐层缝合,回笼。


    (4) 案例展示

     

    C57BL/6小鼠肺炎模型建模

    (5) 常见问题

    ① 动脉粥样硬化模型尽可能选择高脂饮食联合动脉内膜机械性损伤的方式建立。高脂饮食先于球囊损伤术,手术应在高脂饲料喂养 7-10 天后进行,即先有高脂诱因而又有动脉内膜损伤致病因素。

    ② 颈总动脉分离时尽可能分离干净,否则夹闭不好易导致出血,不便于插入球囊损伤管。

    ③ 球囊损伤管到达颈总动脉中段后,进行反复牵拉时,用力一定要轻,以防动物意外死亡。


    服务流程:

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